實時熒光定量PCR(qRT-PCR)
(1)技術(shù)原理
實時熒光定量PCR(Real-time PCR,qRT-PCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,已廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究、病原體定量檢測、疾病分類及其發(fā)病機(jī)理等生命科學(xué)領(lǐng)域。
(2)技術(shù)應(yīng)用
DNA或RNA的相對定量分析:包括病原微生物或病毒含量的檢測,轉(zhuǎn)基因動植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測;基因表達(dá)差異分析:比較經(jīng)過不同處理的樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)、特定基因在不同時相的表達(dá)差異。
【服務(wù)內(nèi)容】
RNA抽取與定量;反轉(zhuǎn)錄;引物設(shè)計及熒光定量PCR、數(shù)據(jù)分析。
(1)客戶須明確檢測目的和具體要求,最好能提供1~2篇文獻(xiàn)或資料。
(2)提供新鮮樣品,組織樣本:質(zhì)量大于100mg;細(xì)胞樣本,細(xì)胞數(shù)大于106;全血樣本(EDTA抗凝):2~5ml。
(3)提供待測基因的全長基因序列或NCBI中的序列號。
(4)提供盡可能詳細(xì)的背景資料: DNA/ RNA 來源、豐度等,如果是cDNA序列請標(biāo)明外顯子拼接位點。
組織 CDH-1 PCR電泳圖