免疫組庫(Immune Repertoire,IR)是指某個個體在任何特定時間點(diǎn)其循環(huán)系統(tǒng)中所有功能多樣性B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的總和。T細(xì)胞和B細(xì)胞分別介導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答,分別通過其表面的T細(xì)胞受體(TCR)和 B細(xì)胞受體(BCR)來識別和結(jié)合抗原,進(jìn)而發(fā)揮功能清除病原體或體內(nèi)腫瘤細(xì)胞。
免疫組庫高通量測序是通過多重PCR或SMART RACE法擴(kuò)增TCR/BCR全長或CDR3區(qū)序列(主要是TCR的β鏈或BCR的重鏈),再結(jié)合高通量測序技術(shù),對機(jī)體免疫組庫的多樣性及每種 T、B細(xì)胞克隆的獨(dú)特性序列組成和變化進(jìn)行分析,從而全面評估機(jī)體的免疫狀態(tài),明確疾病與T、B細(xì)胞克隆組成及變化之間的關(guān)系。隨著免疫組庫高通量測序技術(shù)的不斷發(fā)展和成熟,基于免疫組庫多樣性變化特點(diǎn)的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、腫瘤等疾病療效預(yù)測、疾病的易感性和抵抗性、感染性疾病及疫苗研究等方面都取得了重要進(jìn)展。
數(shù)據(jù)量:1G raw date/樣
(5) 如果客戶自提 RNA,建議最好用進(jìn)口試劑或試劑盒提取,最后溶于無RNA酶的水中。如果是分離的PBMC,RNA濃度大于50ng/μL,總量大于500ng。如果用組織提 RNA,濃度>500ng/μL,總量>5μg。
(5)運(yùn)用國際認(rèn)可的專業(yè)的免疫組庫分析模塊,并結(jié)合我們自己獨(dú)有的生物信息分析算法,所提供的標(biāo)準(zhǔn)化的分析流程即可滿足科研或臨床所需。另外我們還可提供數(shù)據(jù)的深度分析服務(wù)(需另收費(fèi)).
(9)樣本間共有克隆分析
RNA提取和質(zhì)檢-SMART RACE法擴(kuò)增-文庫構(gòu)建-上機(jī)測序-標(biāo)準(zhǔn)信息分析-高級信息分析
T淋巴細(xì)胞通過特異性T細(xì)胞受體(TCR)識別抗原肽,在人類適應(yīng)性免疫應(yīng)答中扮演著重要角色。TCR多樣性與宿主免疫反應(yīng)及腫瘤預(yù)后密切相關(guān)。盡管腫瘤浸潤性T淋巴細(xì)胞對腫瘤預(yù)后有一定的影響,但很少有研究對乙型肝炎病毒(HBV)相關(guān)肝細(xì)胞癌(HCC)中的腫瘤組織和非腫瘤組織中的TCR多樣性進(jìn)行詳細(xì)地特性描述。本研究對來自48位HBV相關(guān)HCC患者的肝癌腫瘤組織進(jìn)行免疫組庫測序。與癌旁組織相比,腫瘤組織CDR3氨基酸(aa)克隆型具有顯著較高的平均數(shù)(2259 vs.1324,p<0.001),TCR多樣性顯著升高(Gini協(xié)同系數(shù),p<0.001;Simpson指數(shù),p<0.01;Shannon熵,p<0.001)。對中央Morisita-Horn相似指數(shù)(MHSI)的分析顯示,在腫瘤組織與癌旁組織之間TCR庫相似性較弱。本研究在肝癌患者腫瘤中觀察到T淋巴細(xì)胞具有廣泛的異質(zhì)性,以及在相鄰癌旁組織中有較高的HEC。腫瘤組織和癌旁組織中差異化T細(xì)胞庫顯示了乙肝相關(guān)性肝癌患者體內(nèi)獨(dú)特的T細(xì)胞免疫微環(huán)境。
圖2 CDR3 aa克隆類型多樣性的分析
拉斯穆森腦炎(Rasmussen encephalitis, RE)是一種罕見的兒科癲癇疾病伴隨有半腦炎癥和進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)缺陷。為了闡明RE的免疫反應(yīng)過程,德國明斯克大學(xué)神經(jīng)學(xué)研究所對RE患者的22例血液,2例腦脊液,和5例腦組織切片樣本還有兒科樣本參照進(jìn)行T細(xì)胞受體(TCR)測序。RE患者樣本表現(xiàn)為外周CD8+T細(xì)胞的擴(kuò)散程度與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。此外,在CNS中,RE是唯一的具有T細(xì)胞擴(kuò)散的兒科癲癇疾病。同時提示在RE中,外周擴(kuò)散的CD8+淋巴細(xì)胞的抗原特異性會侵害CNS,可通過限制其進(jìn)入CNS來改善。
適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的保護(hù)機(jī)體的能力是需要不同的淋巴細(xì)胞抗原受體完成的。然而個體差異基因和后天因素導(dǎo)致的差異和影響還沒有被完全闡釋。斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院通過對5對同卵雙生雙胞胎的B、CD4+ T和CD8+ T淋巴細(xì)胞進(jìn)行分析,來量化遺傳因素在V(D)J重組過程和胸腺選擇中的影響。選取PBMC進(jìn)行RNA提取后利用反轉(zhuǎn)錄獲得目的片段并構(gòu)建免疫組文庫,使用Miseq進(jìn)行2x300 bp測序,最后分析免疫組庫的差異性。